神经药理学报

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神经元-突触丢失与老年痴呆

张均田

2011, 1 (1): 1-15.

摘要 ( 5952 )

PDF(35118KB) ( 2154 )

阿尔茨海默病（AD）的基础和临床研究表明，老年斑和神经纤维缠结与痴呆程度无显著相关。在AD、血管性痴呆、额颞叶痴呆、路易体痴呆脑内均有明显突触丢失。神经元-突触丢失或突触丢失被认为是老年痴呆的主要原因。已发现Aβ和tau磷酸化过程中产生的寡聚体、突触外NMDA受体、含于突触后致密区的shank蛋白可导致突触丢失。因此，AD治疗的新方案包括:①用免疫治疗来清除Aβ寡聚体；②调节mTOR（一种使细胞存活的激酶）和UPS（泛素蛋白酶系统）活性，以维持突触蛋白的正常稳态平衡；③选择性激动突触NMDA受体或选择性拮抗突触外NMDA受体；④增加海马神经发生和增加突触新生。我们最近研究证明人参皂苷Rg1及其代谢产物Ppt能提高突触效能和结构可塑性，以及增加海马神经发生。提示该化合物有望成为防治神经元-突触丢失的药物。

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Enrichment of Motor Neuron-like Cell Precursors Derived from Mouse Embryonic Stem Cells by Density Gradient Centrifugation / 用密度梯度离心法富集源于小鼠胚胎干细胞的运动神经元样细胞前体

Stephanie Richardson Milazi Ph.D., Benjamin Rix Brooks M.D., Jean-Luc Mougeot Ph.D.

2011, 1 (1): 16-26.

摘要 ( 4853 )

PDF(3016KB) ( 2436 )

目的：我们的目标是从源于胚胎体(EBs)的小鼠胚胎干细胞(mESCs)中分离运动神经元样细胞前体(MNLCPs),以用于发展针对运动神经元疾病的药物筛选试验和移植疗法。天然Shh蛋白（或Shh通路激动剂）和维甲酸诱导的胚胎体中, MNLCPs和未分化细胞的含量是不确定的。如果不把未分化的细胞从细胞培养中充分去除, 其可能会干涉药物筛选试验或在移植后增生。我们开发了一种以密度梯度离心法为基础的富集MNLCPs的方法。 方法：我们用Wichterle等人2008年改进的方法, 将mESCs (HBG3:eGFP: HB9) 扩大和分化。通过化学和酶学的无研磨处理, 含有绿色荧光蛋白的MNLCPs和未分化细胞的胚胎体被小心轻轻地离解成单细胞。利用OptiprepTM 8％-20％逐步梯度离心技术将 MNLCPs回收。拥有绿色荧光蛋白的MNLCPs的含量由流式细胞仪检测。 结果：我们的结果表明，在胚胎体形成前，mESCs在明胶包被的培养板上生长，其分化为MNLCPs的能力减少。比较mESCs在明胶，明胶与PMEFs, 及PMEFs包被的培养板上的生长发现，mESCs在PMEFs包被的培养板上产生含绿色荧光蛋白的MNLCPs的得率为54.1％±11.0％（ ±s；n=12），在明胶包被的培养板上的得率为2.8％±1.1％（ ±s；n=9）。用密度梯度离心法获得的含绿色荧光蛋白的MNLCPs的平均含量为87.7％±5.5%（ ±s；n=3）。 结论：我们的数据表明，不使用细胞分选器, 无研磨解离和密度梯度离心法也能用于富集具有高存活率的MNLCPs。有必要对MNLCPs在体外、体内和表型上进行进一步的生理学意义（如神经轴突的生长及形成神经肌肉接头的能力）上的鉴定。

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烟碱类似物ZY-1对淀粉样蛋白产生及转基因阿尔茨海默病小鼠学习记忆的作用

聂惠贞, 王泽剑, 赵文娟, 卢金淼, 张璨, 骆庆和, 王玉亮, 高翔, 殷明

2011, 1 (1): 26-31.

摘要 ( 5800 )

PDF(1522KB) ( 3500 )

目的：观察烟碱类似物ZY-1在细胞水平上对Aβ产生的影响及对转基因阿尔茨海默病小鼠学习记忆的作用。 方法：在转染高表达烟碱受体亚型的SH-EP1-α4β2 nAChR细胞株进行放射配基结合实验；Western blotting检测ZY-1对于转染了APP695质粒的SH-EP1-α4β2 nAChR细胞产生Aβ的影响；在双转基因阿尔茨海默病小鼠B6C3-Tg（APPswe/PSEN1dE9）85Dbo/J品系通过Morris水迷宫试验和跳台试验观察ZY-1对小鼠学习记忆的影响。 结果：1.受体亚型结合分析，亲和力常数Ki＝21.5 mol·L^-1，亲和力很高，显示ZY-1有α4β2亚型结合特异性。2. 烟碱激动剂尼古丁和ZY-1可以显著降低细胞内Aβ水平。3. Morris水迷宫试验和跳台试验表明，ZY-1中、高剂量对模型小鼠的空间学习记忆有显著改善作用。 结论：ZY-1可能具备了作为AD治疗药物进一步开发的潜力，确切的成药性仍需进一步的试验来证明。

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Involvement of Kir6.2-composing ATP-sensitive potassium channels in phencyclidine-induced negative symptoms of schizophrenia / Kir6.2构成的ATP敏感性钾通道在苯环己哌啶诱导的精神分裂症阴性症状中的作用

戴婷，陈中国, 段磊, 丁建花, 范益, 胡刚

2011, 1 (1): 31-38.

摘要 ( 5083 )

PDF(1811KB) ( 3935 )

目的：ATP敏感性钾（K-ATP）通道对多巴胺和谷氨酸能传导具有重要的调节作用，而多巴胺和谷氨酸能传导之间相互作用是精神分裂症病理机制的重要神经化学基础。因此，我们应用Kir6.2（主要表达在神经元的K-ATP亚基）敲除小鼠，通过苯环己哌啶诱导强迫游泳不动时间的延长，模拟精神分裂症的阴性症状，从而研究K-ATP通道在其中的作用。 方法：连续注射14天苯环己哌啶（10 mg•kg-1，i.p.）后，通过观察强迫游泳实验中小鼠不动时间的长短，评价Kir6.2敲除对精神分裂症阴性症状中抑郁样表现的影响；应用高效液相色谱联合电化学检测法观察纹状体多巴胺及其代谢产物、多巴胺更新率的改变；应用溴脱氧尿嘧啶核苷插入法观察海马齿状回颗粒下区神经干细胞增殖的改变；应用Western blot技术观察磷酸化Akt水平的变化。 结果：Kir6.2敲除取消了苯环己哌啶引起的强迫游泳不动时间的延长。不仅如此，Kir6.2敲除还抑制了苯环己哌啶诱导的纹状体多巴胺更新率的增加、海马齿状回颗粒下区神经干细胞增殖的减弱，以及磷酸化Akt水平升高。 结论：Kir6.2组成的K-ATP通道参与了苯环己哌啶诱导的精神分裂症阴性症状，阻断K-ATP通道有望成为治疗精神分裂症的新策略。

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新型组蛋白去乙酰化酶抑制剂DWP0016诱导神经胶质瘤细胞U251周期阻滞及凋亡作用研究

金惠, 刘力锋, 梁雷, 邓卫平, 刘建文

2011, 1 (1): 38-45.

摘要 ( 4223 )

PDF(2381KB) ( 3199 )

目的：观察新型组蛋白去乙酰化酶（Histone Deacetylases，HDACs）抑制剂DWP0016对神经胶质瘤U251细胞株的作用，探讨诱导U251细胞周期阻滞及凋亡作用的机制。方法：采用噻唑蓝（MTT）法检测DWP0016对U251细胞株的增殖抑制作用；采用流式细胞术观察DWP0016对U251细胞周期的影响及凋亡诱导作用；采用实时定量PCR（real-time PCR）检测抑癌因子P21，P53的mRNA水平变化；蛋白免疫印迹法（Western blotting）测定Acetylation-H3，P21，P53，Pi3K，p-Pi3K，Akt，p-Akt的蛋白表达并进行光密度定量。结果：DWP0016抑制U251细胞增殖的半数抑制浓度（IC₅₀=0.531μmol·L^-1) 明显低于阳性对照奥沙利铂(IC₅₀=4.792μmol·L^-1)，组蛋白H3乙酰化水平显著上升；DWP0016作用后，U251细胞中细胞周期阻滞于G₁期并产生凋亡，P21，P53的mRNA水平和蛋白水平明显上升，Pi3K/Akt通路中的Pi3K，Akt的磷酸化水平下降并达活抑癌症)。 结论：DWP0016能明显抑制U251细胞增殖，诱导细胞周期阻滞和凋亡产生，其机制与促进抑癌因子P21，P53的转录及蛋白表达，抑制细胞中Pi3K/Akt生长信号通路有关，具有良好的抗神经胶质瘤潜力和开发应用前景。.

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几种适合药物筛选的抗氧化实验微孔板测定方法及其稳定性研究

张丹参

2011, 1 (1): 45-51.

摘要 ( 4797 )

PDF(1451KB) ( 4182 )

目的： 建立一系列适用于药物筛选的微孔板抗氧化实验方法。 方法： 采用SpectraMax M5连续光谱酶标测试仪，建立抗DPPH氧化活性、清除羟自由基实验方法（邻二氮菲-Fe2+氧化法）、还原能力测定及抗脂质过氧化微孔板抗氧化实验方法。 结果： 这四种抗氧化微板实验方法具有稳定性好，所需试剂种类少、耗材量少，方法简便及可重复性强等共同特点；相对而言，抗DPPH氧化和还原实验两种实验在这几方面更有优势，更适合于作为抗氧化药物的大规模初筛基础试验方法。 结论： 这四种微板抗氧化实验方法，可以广泛应用于药物筛选，特别是高通量药物筛选研究。

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神经干细胞球和单层贴壁神经干细胞的培养及鉴定

郝军荣, 张丽, 秦正红

2011, 1 (1): 51-55.

摘要 ( 5783 )

PDF(9034KB) ( 3560 )

目的：探讨小鼠大脑皮层源性神经干细胞(NSCs)体外培养的两种方法并对培养的细胞进行鉴定。 方法： 分别取孕14~16d的昆明小鼠胚胎脑皮质并用细胞球悬浮培养和单层贴壁培养两种方法进行体外培养，用光学显微镜观察NSCs的生长情况，并用免疫细胞化学鉴定NSCs特异性抗原的表达，经过血清对NSCs分化诱导后进行胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白-2的检测。 结果： ①培养出来的细胞可以扩增生长；②这两种方法分别培养的神经干细胞球和单层神经干细胞经抗巢蛋白免疫细胞染色均呈阳性；③两种培养方法培养出的NSCs经诱导分化后，免疫细胞化学染色显示微管相关蛋白-2、神经胶质酸性蛋白染色阳性。 结论： 采用无血清培养基中加入特定生长因子的神经干细胞球培养和单层贴壁两种培养技术，可培养出在体外稳定增殖并有多向分化潜能的NSCs。

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行为药理学：历史与现状

李俊旭

2011, 1 (1): 55-64.

摘要 ( 6262 )

PDF(1258KB) ( 4274 )

行为药理学作为药理学的一个分支，其发展历史已有50余年。从1955年Peter Dews发表其代表性论文《Studies on behavior. I》以来，行为药理学从无到有，已经发展成为一个活跃的、生机勃勃的新学科。本文拟回顾行为药理学的发展历程，理清其历史发展的脉络，并就行为药理学当前发展的状况作一综述。本文还将提出行为药理学研究中所应注意的几个问题供讨论。

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