摘要： 目的：本文重点研究Nogo-66 对β淀粉样蛋白（Aβ）代谢的调节作用及其分子机制，对Nogo-66 作用机制进行完善；同时，探讨抑Nogo-66 作用对延缓和阻止AD 进程的影响。方法：①体外培养新生大鼠原代皮质神经元两天后，加入不同浓度的Nogo-66 处理，观察细胞形态及定量分析突起生长状况。②通过ELISA 检测不同浓度Nogo-66 作用原代皮质神经元后，Aβ的变化情况。提取新生大鼠原代皮质神经元后，培养两天，加入不同浓度的Nogo-66 处理，继续培养48 h，收集上清培养基，检测细胞分泌的Aβ40 和Aβ42 含量。③体外培养新生大鼠原代皮质神经元两天后，分别加入不同浓度的Nogo-66 受体阻断剂NEP1-40、受体下游信号分子ROCK（rho-associated coiled coil-containing protein kinase）的抑制剂Y-27632 预保护1 h 后，用终浓度为1 μmol·L-1 的Nogo-66处理细胞，继续培养48 h，收集上清培养基，检测细胞分泌的Aβ40 和Aβ42 含量。④体外培养新生大鼠原代皮质神经元两天后，用2 μmol·L-1 的NEP1-40 和100 μmol·L-1 的Y-27632 进行预保护，采用1 μmol·L-1 的Nogo-66 处理细胞造模，Western Blotting 检测Nogo-66 下游信号ROCK 通路上各相关蛋白的表达及其磷酸化水平。结果：①形态学观测结果显示，当浓度为4 μmol·L-1、16 μmol·L-1时，神经元具有明显损伤。MAP2 免疫荧光结果显示，Nogo-66 能显著性抑制突起再生，0.25μmol·L-1、1 μmol·L-1 各剂量组皮质神经元平均突起长度显著性降低，具有效关系。表明Nogo-66能抑制原代皮质神经元突起的再生。②ELISA 结果显示，Nogo-66 能促进Aβ40 和Aβ42 含量。其中0.5 μmol·L-1、1 μmol·L-1 的Nogo-66 能显著增加原代皮质神经元培养基中的Aβ40 和Aβ42 含量，具有量效关系。③加入Nogo-66 受体阻断剂NEP1-40、ROCK 抑制剂Y-27632 后，ELISA 结果显示，与Nogo-66 模型组相比，2 μmol·L-1 的NEP1-40 能拮抗Nogo-66，显著性降低原代皮质神经元培养基中的 Aβ40 的含量；50 μmol·L-1、100 μmol·L-1 的 Y-27632 能拮抗Nogo-66，显著性降低培养基中的Aβ40 和Aβ42 的含量，但量效关系不明显。筛选出 NEP1-40 和Y-27632 最佳作用浓度分别为：2 μmol·L-1、100 μmol·L-1。④ELISA 结果显示，Nogo-66 模型组（只加Nogo-66，不加抑制剂）能显著增加原代皮质神经元和N2a 过表达细胞株（由澳门科技大学馈赠）培养基中Aβ40 和Aβ42 的含量。Nogo-66 受体阻断剂NEP1-40 和ROCK 抑制剂 Y-27632 能拮抗Nogo-66，显著性降低培养基中的Aβ40 和Aβ42 的含量。⑤Western Bolt 结果显示，0.5 μmol·L-1、1 μmol·L-1 的Nogo-66 能显著性增加原代皮质神经元细胞和 N2a 过表达细胞株的ROCK2 和磷酸化的CRMP2 的表达水平，且具有明显的剂量依赖性。结论：①Nogo-66 能抑制原代皮质神经元突起再生，且促进皮质神经元分泌Aβ40 和Aβ42；②Nogo-66 是通过激活Nogo-66 受体及下游信号分子ROCK2 和p-CRMP2 抑制原代皮质神经元突起再生并促进分泌 Aβ40 和Aβ42。