摘要： 目的：tau 蛋白过度磷酸化与AD 的发病机制直接相关，本实验通过冈田酸（okadaic acid，OA）诱导SH-SY5Y 细胞tau 蛋白过度磷酸化实验模型，研究补体C3/C3aR 在 OA 致SH-SY5Y 细胞 tau 蛋白过度磷酸化的作用及机制。通过对以上问题的阐明将为研究针对C3/C3aR 这一靶点开发新型药物保护Tau 蛋白病尤其是 AD 提供理论基础。方法：①采用OA 诱导 SH-SY5Y 细胞，以 tau 蛋白过度磷酸化和细胞活性的变化为观察指标，建立用于 AD 研究的细胞模型。②CCK8 法检测细胞活性。③Western blot 测定 SH-SY5Y 细胞 Ser396，Thr231，Thr205 位点磷酸化tau 蛋白水平。④Western blot 法测定tau 蛋白磷酸化关键调节酶GSK3β，Cdk5，PP2A 的蛋白表达水平。结果：①OA 处理SH-SY5Y 细胞，CCK8 法检测显示细胞活性显著降低，作用随着 OA 浓度的增高和作用时间的延长而增强；40 nmol·L-1 OA 作用 SH-SY5Y 细胞不同时间，可见细胞中 Ser396，Thr231，Thr205 位点磷酸化 tau 蛋白水平于作用后 3 h 开始升高，24 h 达高峰，随后开始下降，48 h 的水平仍高于基础值，提示 OA 可诱导 SH-SY5Y 细胞活性下降和tau 蛋白过度磷酸化。②C3a 受体拮抗剂SB290157 预处理24 h 后，再给予40 nmol·L-1 OA 处理 SH-SY5Y 细胞12 h，检测细胞中Ser396，Thr231，Thr205 位点磷酸化 tau 蛋白水平，可见 Ser396，Thr231，Thr205 位点磷酸化tau 蛋白水平变化同时下调，显著低于单独OA 处理组，提示在 OA 诱导SH-SY5Y 细胞tau 蛋白过度磷酸化过程中，补体C3/C3aR 可能参与其中，C3aR 受体拮抗剂可显著抑制tau 蛋白过度磷酸化。③C3a 受体拮抗剂SB290157 预处理，western blot 结果显示SB290157 可抑制GSK-3β和Cdk5 的蛋白表达，但可上调蛋白磷酸酶PP-2A 的蛋白表达。④通过转染C3aR-siRNA，同样发现OA 不能诱导tau 的过度磷酸化及其调节蛋白的改变。结论：①OA 可诱导SH-SY5Y 细胞活性下降和tau 蛋白过度磷酸化，该细胞模型可用于AD 研究。②在OA 诱导SH-SY5Y 细胞tau 蛋白过度磷酸化过程中，C3a受体拮抗剂SB290157 可抑制SH-SY5Y 细胞 Ser396，Thr231，Thr205 位点磷酸化 tau 蛋白水平。③C3a 受体拮抗剂对过磷酸化tau 蛋白水平的抑制，可能是通过抑制GSK-3β 和 Cdk5 ，同时上调蛋白磷酸酶PP-2A 实现的。