摘要： 目的：运用噬菌体展示技术筛选能够与Aβ42 竞争性结合其受体PirB 的小分子多肽，并验证其生物学功能，为以PirB 受体为靶点的小分子多肽治疗阿尔茨海默病提供新的依据。方法：以PirB 受体为目标蛋白，经过三轮生物淘选，从Ph.D.-7 噬菌体随机展示肽库筛选获得高特异性的单克隆噬菌体，ELISA 检测分析单克隆噬菌体与PirB 的结合能力。提取阳性克隆菌ssDNA，测序翻译，分析比对阳性序列与Aβ42 的相似度及疏水轮廓，合成候选多肽。采用MTT 检测多肽细胞毒性，利用细胞免疫荧光结合实验验证候选多肽是否和PirB 结合。利用链霉素- 亲和素结合实验进一步测量候选肽与PirB 的结合能力，得到解离常数。采用神经元突起损伤模型探究多肽的体外生物活性。Western Bolt 检测PirB 下游信号ROCK2，CRMP2，p-CRMP2 的表达情况。结果：三轮生物淘选后获得29 个阳性克隆，结合ELISA 结果选定11 个阳性克隆，提取ssDNA，测序翻译，体外合成11 条候选肽。经软件分析比对后，其中候选肽P11（命名为P2）与PirB 高亲和力的配体Aβ42有三个相同的氨基酸，与Aβ42 带同样的电荷，具有较高的相似性，更有可能阻断Aβ42 与受体PirB的结合。经过MTT、免疫荧光结合实验及体外神经元损伤模型，对11 条候选多肽进行筛选验证发现P2 为目标肽，P2 可能阻断Aβ42 与受体PirB 的结合。MTT 结果表明P2 在16 μmol·L-1 浓度范围内都不具备生物毒性。免疫荧光结合实验表明P2 结合能力强。细胞荧光共定位实验也表明，P2 能够特异性的与PirB 结合。链霉素- 亲和素结合实验表明，P2 与受体PirB 特异性结合，解离常数 Kd 为 0.128 μmol·L-1。生物学功能表明，在原代皮质神经元突起损伤模型中P2 可拮抗Aβ42介导的突起损伤作用，促进神经突起的再生。WB 结果表明，P2 降低PirB 受体下游蛋白 ROCK2，p-CRMP2 的表达。结论：成功的从噬菌体随机展示肽库中筛选得到具有生物活性的PirB 受体高特异性拮抗肽，命名为P2。P2 与受体PirB 特异性结合，解离常数 Kd 为 0.128 μmol·L-1，P2 能缓解Aβ42 引起的神经生长突起抑制作用，促进神经突起再生，其分子机制为降低PirB 受体下游信号蛋白ROCK2 的表达以及CRMP2 蛋白的磷酸化。