摘要： 目的：为了明确记忆相关基因KIBRA 在阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）转基因动物模型中是否存在表达改变及及其对神经元凋亡的影响，进而探讨KIBRA 如何参与Aβ诱导的神经元凋亡及其相关机制。方法：本研究首先通过免疫组织染色及免疫蛋白印迹的方法，观察在不同月龄APP/PS1 小鼠中是否存在KIBRA 的表达改变。其次，通过TUNEL 免疫荧光染色，观察在KIBRA 基因敲除小鼠中是否存在神经元凋亡。最后，我们使用CRISPR/CAS9 慢病毒及过表达慢病毒分别转染HT22 细胞，建立KIBRA 基因敲除和KIBRA 过表达细胞模型，进而探讨KIBRA 对Aβ诱导的神经元凋亡及其相关机制的研究。结果：①KIBRA 在APP/PS1 转基因小鼠脑内特异性表达：选用9 月龄及12 月龄APP/PS1 小鼠作为AD 研究模型，通过KIBRA 免疫组织染色分析，无论整个海马，还是海马亚区CA1 区和CA3 区，9 月龄和12 月龄APP/PS1 小鼠KIBRA 阳性细胞数量均明显低于对照组，其中12 月龄尤为显著（P<0.01，P<0.001）。免疫蛋白印迹结果同样证实12 月龄APP/PS1 小鼠海马区KIBRA 的表达明显低于野生型小鼠（P<0.001）。随着月龄的增加，KIBRA在APP/PS1 转基因小鼠海马区的表达逐渐减少，提示KIBRA 在AD 小鼠海马区的特异性降低，与学习记忆障碍密切相关。②KIBRA 在神经元凋亡中的重要作用：通过TUNEL 荧光染色发现，与野生型小鼠相比，12 月龄APP/PS1 小鼠海马神经元凋亡比例明显增多（P<0.01，P<0.01）。4 月龄KIBRA 基因敲除小鼠海马神经元凋亡比例比野生型小鼠明显增加（P<0.05），提示KIBRA 在神经元凋亡的发生中扮演不可或缺的角色。③KIBRA 对Aβ诱导的神经元凋亡的保护作用：CCK8及免疫蛋白印迹结果显示，与空病毒组相比，经1 μmol·L-1 的Aβ1-42 寡聚体处理后的KIBRA 敲除组细胞活力明显降低（P<0.01）；凋亡相关蛋白（剪切的PARP、活化的caspase3）的表达量明显增高（P<0.05，P<0.01）。KIBRA 过表达组细胞存活率明显优于空病毒组（P<0.05），凋亡相关蛋白较空病毒组显著减少（P<0.05），进一步提示KIBRA 参与抑制Aβ诱导的神经元凋亡，促进细胞增殖和存活。4. KIBRA 通过激活Akt 信号通路抑制Aβ诱导的神经元凋亡：本实验筛选凋亡相关信号通路，结果显示，在1 μmol·L-1 Aβ1-42 寡聚体处理1 min 后，KIBRA 敲除组Akt Ser473 位点磷酸化水平比空病毒组显著降低（P<0.05）。在Aβ1-42 寡聚体处理1 分钟后，KIBRA 过表达组Akt Ser473 位点磷酸化明显被激活，Akt Ser473 位点磷酸化水平比空病毒组显著增高（P<0.01）。此外，与Aβ1-42 寡聚体干预组相比，Akt 特异性抑制剂（MK2206）预处理组KIBRA 过表达细胞存活率明显降低（P<0.05）；剪切的PARP 表达量明显增高（P<0.05）。以上结果表明KIBRA 通过激活Akt Ser473 位点的磷酸化水平，抑制Aβ诱导的神经元凋亡。结论：KIBRA 作为一种神经保护因子，通过激活Akt 信号通路抑制Aβ诱导的神经元凋亡，促进细胞增殖及存活，为AD 发病机制及治疗药物的研究提供了新的靶点。